Information

När ska endocytosinhibitorer användas i cellbindningsanalyser?

När ska endocytosinhibitorer användas i cellbindningsanalyser?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Jag börjar göra några cellbindningsanalyser och jag skulle vilja att mina proteiner inte endocyteras av mina däggdjursceller. Typiska förslag är att cellerna ska hållas på is och att bindningsexperimentet även sker när cellerna kyls.

Men för att vara säker har det föreslagits att jag ska använda endocytoshämmare. Så mina frågor är, när är endocytoshämmarna nödvändiga? Hur skulle jag veta att endocytoshämmare är nödvändiga? Vilka skulle jag använda egentligen?

Jag inser att det finns både clathrin och icke-clathrin mekanismer för internalisering. Vilken mekanism skulle vara mer användbar att studera för en antikropp-receptorinteraktion?


Som med så många saker beror det på. Dessutom är jag lite otydlig när du säger antikropp-receptor-interaktion, menar du att du har en antikropp som är specifik för en receptor, eller att du studerar Fc-receptorer som binder till antikroppar? (för det följande antar jag det förra)

För de flesta celltyper och de flesta cellytemolekyler kommer enkel antikroppsbindning inte att inducera endocytos, och att hålla cellerna på is är tillräckligt för att förhindra de flesta bakgrundsendocytoser (jag skulle också göra analyserna i ett kallt rum så att även när du tar ut rören ur ishinken förblir de kalla).

Å andra sidan, om du använder mycket fagocytiska celler (som makrofager), och/eller du utlöser en receptor genom tvärbindning eller någon annan mekanism, kan du få en viss endocytos som påverkar dina resultat.

Mekanismen (clathrin vs non) kan också variera, återigen beroende på vad som binds.

Du bör göra en viss optimering - dvs: gör samma analys på en uppsättning prover, med eller utan hämning och se om din antikroppsbindning påverkas. Men var medveten om att många läkemedel för att hämma endocytos också kan göra andra saker, så se upp för artefakter. Kanske läs detta: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18369934


Titta på videon: Transglutaminase in Clathrin Receptor Mediated Endocytosis: Crosslinking of clathrin? (Februari 2023).